Γρήγορο DNA πέψης 5-15Min CE αντιδραστηρίων ενζυμικού BsaI βιοχημικό εγκεκριμένο

Ένζυμα BsaI

τα ένζυμα είναι μια σειρά κατασκευασμένων ενζύμων περιορισμού γιατί η γρήγορη πέψη DNA σε 5-15 ελάχιστα ένζυμα μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να αφομοιώσει τα genomic και προερχόμενων από ιό DNA καθώς επίσης και PCR προϊόντα πλασμιδίων. Όλα τα ένζυμα παρουσιάζουν ανώτερη δραστηριότητα στον καθολικό απομονωτή, απλοποίησε έτσι το ενζυματικό σύστημα αντίδρασης πέψης. Επιπλέον, τα ένζυμα παρέχουν τον άριστο ενζυμικό πλεονασμό, που επιτρέπει την εύκολη πέψη των υπερβολικών ή δύσκολων προτύπων υποστρωμάτων.

Ναυτιλία και αποθήκευση

Τα συστατικά στέλνονται με το πακέτο πάγου και μπορούν να αποθηκευτούν σε -20°C για 2 έτη.

Τέμνουσα περιοχή

5 " - GGTCTC (Ν)1↓-3 "

3 " - CCAGAG (Ν)5↑-5 "

Συνιστώμενοι όροι αντίδρασης

Απομονωτής 1× FuniCut™ Επωάστε σε 37℃.

Θερμική αδρανοποίηση

Επώαση σε 80℃ για 20 λεπτά.

Ποιοτικός έλεγχος

1. Καθορισμός δραστηριότητας: 1 DNA μg pPIC9K αφομοιώθηκε εντελώς με 1 μL του ενζύμου σε 15 λ. σε 37℃ σε έναν συνολικό όγκο αντίδρασης 20 μL.

2. Παρατεταμένες επώαση/δοκιμή δραστηριότητας αστεριών: Καμία ανιχνεύσιμη υποβάθμιση 1 DNA μg pPIC9K λόγω της μόλυνσης νουκλεάσης ή της δραστηριότητας αστεριών δεν εμφανίστηκε κατά τη διάρκεια της επώασης με 1 μL FuniCut™ BsaI για την ώρα 3 σε 37℃. Η πιό μακροχρόνια επώαση μπορεί να οδηγήσει στη δραστηριότητα αστεριών.

3. Ligation και δοκιμή Recleavage (L/R): Μετά από αφομοιωμένος με 1μL το ένζυμο υπό το βέλτιστο όρο, το ανακύκλωσης προϊόν από την πέψη μπορεί να επιδεθεί κάτω από Ligase DNA T4 σε 22℃. Το ligation προϊόν μπορεί να είναι από το ένζυμο.

4. Μη συγκεκριμένη δραστηριότητα ενδονουκλεάσεων: Η επώαση 1 ενζύμου μL με 1 μg το DNA πλασμιδίων γιατί 4 ώρες σε 37℃ οδήγησαν σε καμία αλλαγή ο όρος.

Οδηγίες

1. Πρωτόκολλο για τη γρήγορη πέψη του διαφορετικού DNA

1.1 συνδυάστε τα ακόλουθα τμήματα αντίδρασης στον πάγο στη διαταγή που υποδεικνύεται:

[Σημείωση]: καθαρισμένα *For PCR προϊόντα. Το ποσό απομονωτή 10× FuniCut™ μπορεί να μειωθεί σε 2 μL λόγω της υπόλοιπης ιοντικής δύναμης στα unpurified PCR προϊόντα. PCR το προϊόν συστήθηκε για να είναι καθαρισμένη προγενέστερη πέψη όταν PCR θα χρησιμοποιηθεί το προϊόν για την κλωνοποίηση.

1.2 αναμίξτε ήπια (όχι η δίνη) και περιστροφή κάτω.

1.3 επωάστε σε 37℃ για 15 λ. (DNA πλασμιδίων) ή για 15-30 λ. (PCR προϊόν) ή για 30-60 λ. (genomic DNA).

1.4 προαιρετικός: Αδρανοποιήστε το ένζυμο με τη θέρμανση για 20 λ. σε 80℃.

2. Διπλή και πολλαπλάσια πέψη του DNA

2.1 χρήση 1 μL κάθε ενζύμου και κλίμακας επάνω οι όροι αντίδρασης κατάλληλα.

2.2 ο συνδυασμένος όγκος των ενζύμων στο μίγμα αντίδρασης δεν πρέπει να υπερβεί το 1/10 του συνολικού όγκου αντίδρασης.

2.3 εάν τα ένζυμα απαιτούν τις διαφορετικές θερμοκρασίες αντίδρασης, αρχίστε με το ένζυμο που απαιτεί μια χαμηλότερη θερμοκρασία, κατόπιν προσθέτει το δεύτερο ένζυμο και επωάζει στην υψηλότερη θερμοκρασία.

3. Να ξελεπιάσει επάνω την αντίδραση πέψης DNA πλασμιδίων

[Σημείωση]: Επώαση σε μια θερμοστάτη νερού, θερμοστάτης μετάλλων ή θερμοστάτης άμμου. Αυξήστε το χρόνο επώασης εάν ο συνολικός όγκος αντίδρασης υπερβαίνει 20 μL.

Αριθμός περιοχών αναγνώρισης στο DNA